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植入前遗传学诊断与筛选技术专家共识(2018版) 主页 > 捐卵过程 > >
来源:爱心捐卵网 时间:2018-07-27 09:52
随着辅助生殖技术的不断发展,细胞和分子遗传学诊断技术的迅速发展,植入前遗传学诊断(PGD)和植入前遗传学筛查(植入前遗传学筛查,PGS)发展迅速,发展迅速。为了使技术更加规范和有效,中国妇幼保健协会生殖保健专业委员会、生殖医学专业委员会、中华医学会医学遗传学分会、遗传咨询文胸中国妇幼保健院生殖内分泌专家NCH,根据国际发展和临床应用的实际情况,讨论了临床和实验室专家的共识。中国。

染色体异常由1.1.1个染色体异常的任一个或两个侧面携带,包括易位、罗氏易位、逆转录、复合易位、致病性微缺失或微反应。

1.1.2单基因遗传病具有常染色体显性遗传、常染色体隐性遗传、X连锁隐性遗传、X连锁显性遗传、Y连锁遗传等遗传病的高危性,并在FAMI中诊断致病基因突变。LY清晰,致病基因连锁标记清晰。

1.1.3具有严重疾病的遗传易感性基因的遗传易感性突变,如遗传性乳腺癌的BRCA1和BRCA2突变,具有遗传易感性的严重疾病。

1.1.4人leukocyte antigen(人类白细胞抗原,HLA)匹配的夫妇,他们有严重的血液病,需要骨髓移植治疗骨髓移植,可以选择与以前的孩子生产同类型的HLA同胞。通过PGD,从新生儿脐带血移植造血干细胞移植到患病的同胞身上。

近年来高通量基因检测(PGS 2)的研究和发展,对PGS的临床意义提出了新的课题,包括不同程度的染色体异常嵌合和位点的存在、临床检测技术的准确性、标准。对移植胚胎的选择和放弃、PGS成活率

的计算及其应用等进行了探讨,认为PGS的循证证据尚需进一步研究和验证,其适应症也面临修订和更新。ESPT、PGS可应用于以下方面:

1.2.3种植失败、RIF(复发性植入失败、里夫山)和解理期囊胚数为4~6或更高,囊胚数目在3以上。

1.4.1性别染色体异常数目,如47、XYY、47、XXX等,产生染色体异常后代的概率为低{1,2},不推荐PGD;47,XXY后代染色体异常风险增加{ 3 },PGD可被视为APP。轮流的

在选择实施PGD/PGS之前,夫妇需要接受至少一种遗传咨询,以充分了解自己的生殖和遗传风险,了解现阶段可能的医学干预措施及其优缺点,选择治疗方式V。含糊不清,并保存相关的咨询记录。

包括收集患者及相关家属的原始临床资料和基因检测结果,绘制家谱图,询问夫妇的病史、出生史、专科检查和健康评估结果;我们应该评估儿童的现状和诊断和治疗,并判断病人是否可以等待。

结合家庭调查和遗传检测结果,以及相关疾病的一般遗传规律,我们全面评估了生殖风险。

可能的干预措施,如产前诊断,PGD/PGS,配子捐赠,以及在现阶段不同干预技术的优缺点,被告知可能的干预措施。在选择PGD/PGS周期,夫妇需要充分。了解整个过程中涉及的各种风险,包括常规IVF的治疗、PGD/PGS的胚胎活检、冷冻复苏的损伤、可能的个别胚胎的不确定诊断、非移植胚胎的不确定性和发育PO。发色团的嵌合胚胎的性别、不能识别染色体异常的携带者、胚胎的生物学特性以及检测技术的局限性可能导致误诊的风险,以及产前诊断和诊断的维持。妊娠。

3.2在本期无完全正常移植胚胎的情况下,经遗传咨询和知情同意后,患者可自愿选择非整倍体异常胚胎{ 4 }的移植,并选择嵌合胚胎,其移植风险较低。

3.3在单基因疾病PGD的实施中,携带有致病突变但不易感染的胚胎可作为替代胚胎使用。

PGD胚胎移植后持续性妊娠需进行有创产前诊断,现阶段无需进行无创性产前筛查,随访妊娠结局和新生儿情况。

5.1对夫妇在进入PGD/PGS治疗周期之前需要至少接受一次遗传咨询,并保持完整的咨询记录、知情同意和医疗记录。

PGD/PGS循环表明,应采用ICSI授精,以减少母体和亲本来源精子对下游遗传检测的准确性的影响,特别是在核酸扩增技术的下游检测中。

当荧光原位杂交(FISH)用于检测胚胎遗传学时,也可使用体外受精后形成的囊胚,但精子和其它细胞核的污染应警惕。

卵裂期的活检通常在授精后66~70小时进行,对6~8个细胞和30%个片段的胚胎进行活检,1个卵裂球通常为活组织检查,最多不超过2个,活检后胚胎可连续生长2~3天,成为囊胚。这一时期,如果胚胎遗传学诊断完成,可以进行新鲜的循环移植。

囊胚活检对胚胎发育潜能影响不大,已成为PGD/PGs的主要活检方法。在受精后第五~6天和囊胚完全扩张后进行囊胚活检,建议活检的评分应高于4BB,A。活检细胞数应为5~10枚,胚泡活检后胚胎需立即冷冻保存。在完成胚胎遗传学分析后,选择正常胚胎的复苏和移植。

3.1.1透明带的打孔方法有机械法、酪氨酸法和激光法,目前激光法较为常用,应避免活检过程中对细胞的热损伤。

3.1.2机械打孔和激光方法可用于极体活检前受精。酪氨酸酸可能对锭子产生不利影响。

第一或第二极体应根据基因测试的要求单独或同时取出;在切割阶段活检中应去除1~2个细胞,如果需要切除2个细胞,则活检胚胎应包含6个以上的细胞。囊胚活检采集的滋养层细胞数应控制在5~10之间。

重复活检将影响胚胎的发育潜能。然而,当第一次活检是未知的时,可以考虑两种活检(包括卵裂胚胎和囊胚);如果胚胎在活检后冻结,{ 5 }可以在复苏后重新检查。

卵裂球在卵裂期活检时,应选择细胞核和单核细胞。胚泡活检的位置应远离细胞内的肿块。

在等待PGD/PGS基因检测结果时,需要对活检后的胚胎进行冷冻保存,建议采用玻璃化技术,活检后卵裂期或囊胚期冷冻保存的方法与常规方法相同。L胚胎冷冻法。

下游采用核酸扩增法进行遗传试验。经活检去除的细胞应置于含有2.5 L磷酸盐缓冲液(或遗传检测试剂盒所需的预试剂)的PCR管中,并将少量洗涤液作为空白白色对照除去到空白PCR管中。

不同的细胞固定方法可获得满意的结果;在处理过程中,应注意固定剂的隔离和防护措施。

6.1.1和ICSI体外胚胎操作实验室标准进行了100层层流无菌液滴,37度恒温,并覆盖无菌矿物油。

为了减少胚胎间的污染,6.1.2必须确保每个微滴中只包含一个胚胎。活检针和活检材料应在没有活检细胞成分残留物的情况下转移。

胚胎活检技术人员应具备熟练的ICSI操作经验,严格遵守无菌操作原则,防止外源性污染。

标准化临床咨询后,单基因遗传病高危人群已确定;夫妻双方均携带有遗传易感性的基因突变,有严重疾病;HLA选择。

为了避免因扩增、扩增、等位基因脱落、ADO和样品污染等原因造成的误诊或诊断,建议对PGD中的胚胎进行基因检测,同时对突变位点和TH进行直接分析。遗传多态性位点的连锁分析({6,7})。

连锁分析的遗传多态性位点1.2~2可以是短串联重复序列(STR)或单核苷酸多态性位点(SNP)。

1.2.3表明,至少2个多态位点能够在致病突变位点和下游1 MB位点提供遗传信息,并且避免在相邻序列或多核苷酸序列中选择具有高同源性、高GC含量的SNP位点。

1.2.5对于HLA配体,连锁分析的遗传多态性位点需要覆盖HLA-A、HLA-B、HLA-DRA和HLA-DQB1的上游和下游,并且可以选择至少5个多态位点来提供每个区域的遗传信息。

1.3.1套式PCR方法,其中第一轮多重PCR扩增多个位点(包括连锁位点的突变位点和多态位点)。

1.3.2全基因组扩增(WGA)也可分为基于PCR和非PCR的扩增方法,WGA扩增产物可通过荧光PCR、Sanger测序、单核苷酸多态性(SNP阵列){8}、9}、HI等多种方法进行鉴定。GH吞吐量测序(下一代测序,NGS){ 6 },联合检测。

1.4.2应选择突变位点和下游的多态位点,并在家系样本中进行连锁分析,选择能提供遗传信息的位点的单倍型图。

在执行PGD检测之前,1.4.3.1需要验证协议在单个小区上的效率,评估目标检测站点放大和ADO率的有效性。

1.4.3.2试验样本可为淋巴细胞、颗粒细胞、口腔黏膜细胞、胚胎细胞等。值得注意的是,细胞的来源可能会影响扩增效率和ADO的速率。

1.4.3.3使用卵裂期活检,每个验证样本应包含1个细胞,每个囊胚活检样本应包含4~10个细胞。

如果1.4.3.4使用直接PCR扩增,则建议50个验证样本(包括有致病突变的细胞和正常细胞,如果可能的话,被测试)。

1.4.3.6扩增效率为90%,ADO率为10%,如果ADO率较高,可适当增加上游和下游连锁遗传多态位点,分析{ 10 }。

2.2.1只能检测异常染色体,同时分析染色体或染色体异常夫妇的染色体数目。

2.2.2性别选择可用于未知性别连锁遗传病的遗传诊断,但对于有明确遗传诊断的家庭,建议进行突变分析,不推荐性别选择。

2.2.4染色体结构易位,PGD检测不能识别携带者。条件实验室可以提供载体测试,但需要全面评估在测试中使用的技术。

2.2.对于胎儿非整倍体筛查,建议同时分析所有染色体异常(综合染色体筛查,CCS)的方法,不推荐FISH技术。

2.3.1.1套式PCR方法的第一轮多重PCR应同时扩增靶染色体的特异位点,第二轮定量PCR应用于分析各染色点拷贝数的{ 11 }。

2.3.1.2WGA结合高通量遗传检测技术在WGA检测中,各种高通量的遗传检测技术可用于检测染色体拷贝,如微阵列比较基因组杂交(阵列CGH){12,13},单核苷酸多态性微阵列。AY(SNP阵列){14,15},高通量测序(NGS){16,17},等等。

2.3.2 FISH检测应为靶染色体选择不同的核酸探针,当检测到染色体易位载体产生的胚胎时,所选择的探针组合需要能够识别所有可能易位的染色体不平衡胚胎。ORE易位片段小,超过高通量基因检测技术的有效分辨率,应首选鱼类检测。

2.4.1阵列CGH、SNP阵列、NGS等技术已经商业化,具有标准化的操作程序和质量控制参数。在第一次临床应用之前,本地实验室需要验证检测平台的有效性和稳定性,每种情况下通常不需要临床前预测试。

2.4.2使用FISH分析染色体拷贝数。有必要预先对患者外周血中的中期染色体核型进行验证,并检测探针对间期核的荧光强度和特异性。

各临床PGD/PGS实验室应根据自身的条件和特点独立选择检测技术平台,所有测试方法都需要标准操作规程(SOP),不同的检测技术平台应设置质量控制参数。根据具体过程的需要,在实验的关键环节中,本指南仅为PGD实验室的一般质量控制措施提供以下建议:

3.1个利用核酸扩增检测PGD/PGS的实验室需要严格遵循临床遗传扩增实验室工作标准的一般原则。

3.3利用核酸扩增法进行PGD/PGS检测,扩增的第一步需要建立细胞洗涤液的空白控制和试剂的空白控制,以评估可能的污染和来源。

3.5使用商业化的试剂盒检测技术,如阵列CGH、SNP阵列、NGS等,需要建立适合本地实验室的SOP程序和质量控制方法。

3.7检测结果的数据需要两个人独立分析和解释,最后第三人将对结果进行检查和判断。未达成一致的胚胎应被鉴定为未知的。不推荐在PGD移植未鉴定的胚胎。

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